Mesure de l'activité des MMP

L’activité des Métalloprotéases Matricielles peut être visualisée selon plusieurs méthodes.

- Dosage sur substrat peptidique

Dans cette méthode, il s’agit tout d’abord de déterminer la teneur en protéines de l’exsudat de plaie – teneur relativement constante entre les patients - puis de mettre en contact une petite quantité de protéines issues de l’exsudat de plaie avec un substrat peptidique. Dès lors que ce substrat est clivé par les métalloprotéases (MMP-2 et 9), un changement de couleur est observé et, plus la couleur change, plus l’activité des MMP est importante dans le liquide prélevé .

Ce dosage mesure l’activité nette des MMP, résultat de l’équilibre entre protéases et inhibiteurs endogènes.

- Zymographie sur gélatine

La technique de zymographie consiste à appliquer sur un échantillon de protéines issues de plaies de la gélatine (substrat des gélatinases endogènes) couplée à la fluorescéine piégée. Lorsque les MMP des cellules clivent ce substrat, la fluorescéine est libérée et visualisée au microscope. L’intensité du signal fluorescent augmente avec l’activité protéolytique nette, résultante de l’équilibre entre protéases et inhibiteurs endogènes.

Cette méthode mesure également l’activité nette des MMP, résultat de l’équilibre entre protéases et inhibiteurs endogènes.

Dosage sur substrat peptidique

Zymographie sur gélatine